Als größtes Haus der Nationalgalerie beherbergt es die Bestände der Alten und Neuen Nationalgalerie, der Friederichwerderschen Kirche, des Museums Berggruen und der Sammlung Scharf-Gerstenberg. Der Besucher kann die Entwicklung der Kunst in den Bereichen Malerei, Skulptur, Objektkunst, Video, Film und Multimedia von den 1960er Jahren bis heute nachvollziehen. In der Sammlung finden sich bedeutende Namen wie John Cage, Wolf Vostell, Gerhard Richter, Melvin Moti und Andreas Gursky.
Wechselnde Sonderausstellungen zeitgenössischer Kunst, etwa von Harun Farocki, Ingeborg Lüscher oder Lothar Wolleh, zeigen den lebendigen Diskurs künstlerischer Poetiken mit der politischen und gesellschaftlichen Realität. Ein umfangreiches Vermittlungsprogramm erleichtert Jung und Alt den Zugang zum Gezeigten.